EXIGUSS VITA. Microbiología e innovación.

Practica No. 3

15 Oct 14 - 20:07

CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLOGICO INDUSTRIAL Y DE SERVICIOS NO. 128.

Practica #3 Pruebas bioquímicas

Submódulo 3: Ejecuta técnicas de identificación de Microorganismos con base a las normas.

Integrantes: Cuen Andrade Jorge Luis, Duran Salazar Luisa María, Figueroa García Larissa, García Zapien Julio Cesar, Gómez Ríos Juan Antonio, González Arrieta Edgar Octavio, González Gómez Cynthia Judith, González Holguín Karen Cecilia, González Pérez Ámbar Verónica.

Facilitadora: Ing. Acosta Jessica.

Fecha: 15 de octubre del presente año.

 

 

Introducción:

Uno de los sistemas más importantes para la identificación de microorganismos es observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo.

Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presión de oxígeno adecuado, así como un grado correcto de acidez o alcalinidad.

El agar es un elemento solidificante muy empleado para la preparación de medios de cultivo. Se licúa completamente a la temperatura del agua hirviendo y se solidifica al enfriarse a 40 grados. Con mínimas excepciones no tiene efecto sobre el crecimiento de las bacterias y no es atacado por aquellas que crecen en él.

Las pruebas bioquímicas son una serie de análisis clínicos que sirven a un médico como apoyo a la hora de diagnosticas infecciones causadas por agentes patógenos como las bacterias.

Las pruebas bioquímicas consisten en distintos test químicos aplicados a medios biológicos, los cuales, conocida su reacción, nos permiten identificar distintos microorganismos presentes. Se trata de inocular microorganismos en medios de cultivo (sustancias alimenticias preparadas artificialmente) adecuados para observar su crecimiento.

Su sistema de funcionamiento generalmente consiste en determinar la actividad de una vía metabólica a partir de un sustrato que se incorpora en un medio de cultivo y que la bacteria al crecer incorpora o no.

Las pruebas bioquímicas han sido ampliamente utilizadas para diferenciar bacterias. Estas pruebas se fundamentan en demostrar si el microorganismo es capaz de fermentar azúcares, la presencia de enzimas, la degradación de compuestos, la producción de compuestos coloreados, etc. Aun bacterias fuertemente relacionadas pueden separarse en dos especies diferentes con base a pruebas bioquímicas.

A continuación, se desarrollan diferentes técnicas para la identificación de algunos microorganismos y productos obtenidos en la relación ya mencionada, microorganismo-medio.

Resumen:

La práctica esta vez consistió en introducir a la práctica anterior el método de estriado en tubo, a lo cual se le añadieron pruebas bioquímicas para designar específicamente la bacteria de la que se trataba, hay que añadir que solo se tomaron bacterias gram negativas cultivadas en agares nutritivos.

Se inicio con lo principal que es de cada practica, esterilizar el material, esta vez se dieron pocos días para la practica en general por lo que el mismo día que se esterilizo el material se creó el agar nutritivo, el verde bilis brillante y el Mc Conkey.

Al día siguiente se consiguieron las muestras que irían en las cajas Petri. Al mismo tiempo se esterilizaron los tubos de ensaye y se creó un nuevo agar que iría en esos tubos de ensayo, cabe aclarar que cada tipo de agar era exclusivo para el uso de una prueba bioquímica especifica.

El tercer día nos sirvió para contar las colonias, hacer tinción e identificar cuáles eran Gram negativas ya que estas serian utilizadas para inocular y estriar los tubos de ensayo.

El último día consintió en identificar cada bacteria de acuerdo a las características y diferencias que tuvieron las series de tubos de ensaye con varias pruebas bioquímicas realizadas.

Abstract:

The practice this time consisted of introducing to the previous practice the grooving method in pipe, to which biochemical tests were added to him to designate specially the bacterium of which it was a question, it is necessary to add that only bacteria took gram negative cultivated in agares nourishing. I initiate with the main thing that is of every practice, to sterilize the material, this time a few days happened (existed) for the practice in general for what the same day that sterilized the material created the nourishing agar, green brilliant bile and Mc Conkey. On the following day there were obtained the samples that would go in the boxes petri. At the same time the assay pipes were sterilized and there was created a new agar that would go in these test-tubes, it is necessary to clarify that every type of agar was exclusive for the use of a specific biochemical test. The third day served to us to count(tell) the colonies, to do coloring and to identify what negative Gram was since these would be used to inoculate and to flute the test-tubes. Last day consented in identifying every bacterium in accordance with the characteristics and differences that had the series of pipes of assay with several realized biochemical tests

 

Materiales y métodos:

Lista de materiales

• Guante. • Asas de platino. • Porta objetos. • Cubre objetos. • Microscopio. • Vaso de precipitado • Tubos de ensaye • Gradilla

Lista de sustancias, reactivos o muestras

• Klinger • Agar Mio • Agar nutritivo. • Agar EMB. • Cristal violeta. • Iodo-lugol. • Alcohol-cetona. • Zafranina. • Aceite de inmersión. • Agar sim • Caldo • McConkey • Agua de baño • Tierra contaminada

 

 

Procedimientos:

1. Se envuelven las cajas Petri con papel canela y se introducen en la autoclave para esterilizar.

2. Hacer los cálculos necesarios para preparar la cantidad deseada de agar.

3. Verterlo en el matraz con la cantidad de agua destilada a utilizar.

4. Calentar la mezcla con la ayuda del mechero y agitar continuamente.

5. Retirar de la llama después de que haya hervido por dos minutos y colocar el gorro de papel canela para ser esterilizado.

 

Realización del estriado.

1. Se realiza el vaciado correspondiente

2. Se prepara la muestra a inocular.

3. Después de esterilizar el asa con la flama del mechero se toma una gota de la muestra.

4. Con una mano tomar la caja, abrirla con la misma aproximadamente a 45º y se hace el estriado que mejor se maneje con la mano contraria.

5. Una vez terminado el estriado, las cajas son introducidas en la incubadora.

 

Morfología.

1. Después de unos días, se procede a sacar los medios de cultivo de la incubadora, para realizar la cuenta de colonias y la morfología de cada una. Tabla 1.

2. Para hacer la morfología de las bacterias se realiza la tinción (en esta práctica se hizo la tinción de Gram).

2.1 Se coloca una gota de agua en un portaobjetos, previamente etiquetado con la colonia que se trabajara sobre él.

2.2 Tomar muestra de una colonia y se dispersa en la gota de agua con la ayuda del asa.

2.3 Dejar secar, para proceder a fijar la muestra (se pasa 3 veces el portaobjetos por la llama del mechero).

2.4 Se agrega una gota de cristal violeta por 1 min. Y se lava en forma de Z.

2.5 Se agrega una gota de iodo-lugol por 1 min. Y posteriormente se lava.

2.6 Se agrega una gota de alcohol-cetona por 30 segundos y se lava.

2.7 Después agregar una gota de safranina por 30 segundos y se lava.

2.8 Finalmente se agrega aceite de inmersión y se coloca un cubreobjetos para después observarse en el microscopio a 100X.

3. En seguida se hace la morfología de cada bacteria. Tabla 2.

 

Procedimiento 3: Pruebas bioquímicas

1. Se realiza las tinciones de gram y la morfología bacteriana de cada colonia.

1.1 Identificar las bacterias gram negativas.

2. Se prepara un serie de pruebas bioquímicas se etiquetan y se acomodan en una gradilla.

2.1 Después se esteriliza el asa de punta con la flama del mechero se toma una muestra de la colonia identificada como gram negativa.

3. Con una mano tomar el tubo, destaparlo y pasarlo por el fuego 3 veces.

3.1 Se realiza el estriado introduciendo el asa casi hasta llegar al fondo.

3.2 Una vez terminado el estriado se vuelve a pasar el tubo por el fuego 3 veces y se tapa el tubo.

3.3 Se repiten los mismos pasos en toda la serie.

3.4 A excepción de los caldos, el asa con la muestra se introduce y se agita en el tubo.

4. Después se acomoda cada una de las series en la gradilla que es introducida en la incubadora.

 

Interpretación de pruebas

1. Un día después, se procede a sacar las pruebas bioquímicas de la incubadora, para realizar la interpretación de cada una de las series.

2. Para hacer la interpretación se utilizó una tabla de interpretación bioquímica. Tabla 3. Tabla 5.

3. Volvieron a guardarse las pruebas en la incubadora.

4. Al siguiente se realizó la interpretación del crecimiento bacteriano en los tubos. Tabla 4. Tabla

5. Por último se prepara el material para esterilizar y matar cualquier agente patógeno.

 

Resultados:

Morfologia de colonias:

Agar No. Col. Naranjas Cremas Incontables Forma Borde Superficie

Nutriti

vo 1 28 ---------- --------- 1 Circular Irregular Entero Plana Papilada

Nutriti

vo 2 381 284 97 ---------- Circular Irregular Entero Plana

Nutriti

vo 3 14 6 8 ----------- Circular Irregular Entero Plana Papilada

Nutriti

vo 4 13 ------ 13 1 Irregular Circular Rizoide Lobulado Papilada

Nutriti

vo 5 20 ------- 20 --------- Circular Entero Plana

Nutriti

vo 6 1021 41 980 ---------- Circular Entero Plana

McCo

nkey 1 8 ---- ---- ---------- Circular Entero Plana

McCo

nkey 2 5 ---- ---- ---------- Circular Entero Convexa Plana

McCo

nkey 3 ---- ---- ---- --------- -------- -------- --------

McCo

nkey 4 45 ---- ---- ---------- Circular Fusiforme Entero Plana Convexa

VBB 1 6 ---- ---- ---------- Circular Entero Plana Convexa

VBB 2 15 ---- ---- ---------- Circular Irregular Entero Plana Convexa

VBB 3 70 ---- ---- ---------- Circular Irregular Entero Plana Convexa

VBB 4 11 ---- ---- ---------- Circular Irregular Entero Plana

 

Identificación de series bioquímicas

Primera serie – Serratia- Muestra tomada de agua de baño- Colonia #1

LIA Negativo Nutritivo 6 Crema grumosa

Kligler Negativo Nutritivo 6 Crema grumosa

Caldo Negativo Nutritivo 6 Crema grumosa

SIM Negativo Nutritivo 6 Crema grumosa

MIO Negativo Nutritivo 6 Crema grumosa

 

Segunda serie – Serratia- Muestra tomada de agua de baño- Colonia #2

LIA Negativo Nutritivo 6 Crema normal

Kligler Negativo Nutritivo 6 Crema normal

Caldo Negativo Nutritivo 6 Crema normal

SIM Negativo Nutritivo 6 Crema normal

MIO Negativo Nutritivo 6 Crema normal

 

Tercera serie –Enterobacteria- Muestra tomada de agua de baño- Colonia #3

LIA Positivo Nutritivo 2 Colonia naranja

Kligler Positivo Nutritivo 2 Colonia naranja

Caldo Positivo Nutritivo 2 Colonia naranja

SIM Positivo Nutritivo 2 Colonia naranja

MIO Positivo Nutritivo 2 Colonia naranja

 

Cuarta serie –Enterobacteria- Muestra tomada de agua de baño- Colonia #4

LIA Positivo Nutritivo 2 Colonia naranja

Kligler Positivo Nutritivo 2 Colonia naranja

Caldo Positivo Nutritivo Colonia

2 naranja

SIM Positivo Nutritivo 2 Colonia naranja

MIO Positivo Nutritivo 2 Colonia naranja

 

Discusión:

Como fundamento de lo aprendido se pusieron en práctica los medios de cultivo, técnicas de tinción y pruebas bioquímicas. Se tenía un conocimiento previo a los pasos a realizar.

Esta práctica se llevó a cabo en pocos días, todos los integrantes de equipo colaboraron en la identificación de bacterias en placa y tubos de ensaye, se puso en práctica las pruebas bioquímicas.

Uno de los aspectos difíciles que se enfrentaron por equipo fue el estriado en tubo ya que el espacio y método era totalmente distinto a la de una placa.

A pesar de todos los obstáculos que se enfrentaron y después de un razonamiento y dialogo entre el equipo la practica concluyo exitosamente, y el objetivo principal que se tenia se cumplió.


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